兔/鼠通用型Streptavidin-HRP試劑盒說明書(shu)

    SPRabbit&MouseHRPKit

    Cat.No.K0120

    保存：2-8℃

*本試劑盒僅(jin) 適用於(yu) 一抗為(wei) 兔源或鼠源抗體(ti) 的IHC實驗

    產(chan) 品簡介

      本試劑盒根據生物素(Biotin)與(yu) 鏈黴親(qin) 和素(Streptavidin)具有很強親(qin) 和力的原理設計。在兔源或鼠源的一抗與(yu) 相應的靶抗原結合後，本試劑盒中的生物素化抗·兔/鼠通用型二抗與(yu) 一抗特異結合；二抗上標記的生物素與(yu) 標記了過氧化物酶（HRP）的鏈黴親(qin) 和素結合，形成抗原～特異性一抗～生物素化的二抗～HRP標記的鏈黴親(qin) 和素複合物。HRP可以催化底物顯色，從(cong) 而推斷待檢抗原的存在及分布。該試劑盒使用的生物素化二抗、SA-HRP，均采用優(you) 化的標記和純化技術，使得其染色有更高靈敏度和更低的背景，適合於(yu) 檢測福爾馬林固定石蠟包埋組織切片，以及冰凍切片、細胞爬片、新鮮製備的血塗片等。兔/鼠通用型Streptavidin-HRP試劑盒適合與(yu) 上海研謹生物即用型或濃縮型抗體(ti) 配套使用。試劑盒不包括酶底物顯色劑，請另行購買(mai) 與(yu) 過氧化酶適配的DAB或AEC顯色係統。

注意事項

 以1.每張切片加入1滴（約50μl）計算，3ml可做60張切片，18ml可做360張切片。

對2.於(yu) 內(nei) 源性生物素含量比較豐(feng) 富的組織，使用本試劑盒時最+*好用內(nei) 源性生物素阻斷劑進行封閉。

3.實驗過程中避免組織片幹燥，因此各步孵育時工作液用量必需充足，保證*覆蓋組織樣本，且盡量在濕盒中進行孵育。

4.為(wei) 獲得最+*佳實驗結果，請務必優(you) 化實驗條件及試劑用量。

5.  本產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研，不能用於(yu) 人體(ti) 反應或人體(ti) 治療。  

使用方法

 1.  常規處理欲檢測的石蠟或冰凍組織切片或細胞爬片等樣本。

1）組織切片或細胞爬片染色前處理：

a.石蠟切片

         脫蠟水化：60ºC烤片1小時，二甲苯脫蠟二次，每次5分鍾；再依次浸入梯度乙醇（無水乙醇－無水乙醇－95%－85%－75%乙醇）和蒸餾水中各5分鍾水化。

 b.冰凍切片和細胞爬片

切片（或爬片）浸於(yu) 0.01MpH7.4PBS洗滌3次×5分鍾。然後用0.1%TritonX-100覆蓋組織（或細胞）浸潤15分鍾，0.01MpH7.4PBS洗滌2次×5分鍾。

 2）石蠟切片的抗原修複：絕大大多數情況下，石蠟組織切片用檸檬酸緩衝(chong) 液高壓修複都是適合的。修複工作液配製：1L去離子水中加入10ml檸檬酸緩衝(chong) 液（IHC抗原修複液,100×)（Cat#：YJ0128），混勻即可。修複過程：修複液加入高壓鍋內(nei) ，待修複切片浸於(yu) 修複液中（必需沒過組織），蓋上壓力鍋蓋，加熱至均勻噴汽，

 從(cong) 噴汽開始計時，1~2分鍾後壓力鍋離開熱源，自然冷卻至室溫，取出切片，蒸餾水淋洗後，再用PBS（0.01MpH7.4）漂洗2次，每次3分鍾。

 2.  滴加適量試劑1（內(nei) 源性過氧化物酶封閉液），室溫孵育10分鍾，PBS充分淋洗。

3.  滴加適量試劑2（封閉用正常羊血清工作液），室溫孵育10分鍾，甩幹。

4.  滴加適量一抗工作液（商品化即用型抗體(ti) 或適當比例稀釋的濃縮抗體(ti) ），按實驗要求孵育，然後PBS充分淋洗。

5.  滴加適量試劑3（生物素標記羊抗兔/鼠二抗工作液），室溫孵育10分鍾，PBS充分淋洗。

6.  滴加適量試劑4（HRP標記的鏈黴親(qin) 和素），室溫孵育10分鍾，PBS充分淋洗。

7.  滴加顯色工作液顯色（DAB或AEC）。

8.  複染，脫水透明，封片。