小鼠腦微血管內(nei) 皮細胞(bEnd.3)

細胞介紹

細胞轉染了表達多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉錄病毒載體(ti) 。

細胞特性

1） 來源：BALB/c小鼠腦

2） 形態：內(nei) 皮細胞樣

3） 含量：>1x10⁶ 個(ge) /mL

4） 汙染：支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測為(wei) 陰性

5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：使用含有優(you) 質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞後，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min後，於(yu) 潔淨操作台棄去上清，加入推薦使用的培養(yang) 基後轉移至10cm培養(yang) 皿或者T75培養(yang) 瓶中培養(yang) ，傳(chuan) 代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體(ti) 操作見細胞培養(yang) 步驟。

細胞用途：僅(jin) 供科研使用。

細胞培養(yang) 步驟

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

1） 準備DMEM培養(yang) 基(DMEM，GIBCO，貨號11965-092)，90%；胎牛血清，10%。

2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養(yang) 基，10%DMSO，現用現配。液氮儲(chu) 存。

二． 細胞處理：

1） 複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。

2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

對於(yu) 貼壁細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後加入少量胰酶，細胞變圓脫落後，加入約1ml含血清的培養(yang) 基後加入凍存管中，再添加10%DMSO後進行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。

2. 所有動物細胞均視為(wei) 有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台內(nei) 操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟(diu) 棄。

實驗代做服務：