質粒小量快速提取試劑盒

Rapid Mini Plasmid Kit

產品信息： 

保存條件：本試劑盒在室溫儲(chu) 存 18 個(ge) 月不影響使用效果。

產(chan) 品介紹：

本試劑盒采用改進 SDS-堿裂解法裂解細胞，離心吸附柱內(nei) 的矽基質膜在高鹽、低pH 值狀

態下選擇性地

結合溶液中的質粒DNA，再通過漂洗液將雜質和其它細菌成分去除，後低鹽、高 pH 值

的洗脫緩衝(chong) 液

將純淨質粒DNA 從(cong) 矽基質膜上洗脫。

產品特點：：

1. 離心吸附柱內(nei) 矽基質膜全部采用進口特製吸附膜，柱與(yu) 柱之間吸附量差異極小，可重複

性好。克服了國產(chan) 試劑盒膜質量不穩定的弊端。

快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯-*仿等試劑，也不需要乙醇沉澱。獲得的質粒產(chan) 量高、純度好，可以直接用於(yu) 酶切、轉化、PCR、體(ti) 外轉錄、測序等各種分子生物學實驗。

注意事項：

1.第-次使用時，將試劑盒所帶的全部 RNase A 加入溶液 P1 後（終濃度 100ug/ml） 於(yu)  2-8℃保存。如果溶液 P1 中 RNase A 失活，提取的質粒可能會(hui) 有微量 RNA 殘留， 在溶液 P1 中補加 RNase A 即可。

2.環境溫度低時溶液 P2 中 SDS 可能會(hui) 析出渾濁或者沉澱，可在 37℃水浴加熱幾分鍾， 即可恢複澄清，不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。

3.避免試劑長時間暴露於(yu) 空氣中產(chan) 生揮發、氧化、pH 值變化。

4.本試劑盒適用菌株為(wei)  XL-1 Blue 和 DH5a 等核酸酶含量低缺陷型菌株。所用菌株為(wei) JM 係列、HB101 等 endA 菌株或野生型菌株，核酸酶含量豐(feng) 富，應購買(mai) 本公司生產(chan) 的高純度質粒小量快速提取試劑盒。

5.溶液 P3 中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水衝(chong) 洗。提取質粒的量與(yu) 細菌培養(yang) 濃度、質粒拷貝數等因素有關(guan) 。一般高拷貝質粒，建議接種單菌落於(yu)  1.5-4.5ml 加合適抗生素的 LB 培養(yang) 基，過夜培養(yang)  14-16 個(ge) 小時，可提取出多達 20µg 的純淨質粒。如果所提質粒為(wei) 低拷貝質粒或大於(yu)  10kb 的大質粒，應適當加大菌體(ti) 使用量，使用 5-10ml 過夜培養(yang) 物，同時按比例增加 P1、P2、P3 的用量，其它步驟相同。

6.得到的質粒 DNA 可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與(yu) 純度。OD₂₆₀ 值為(wei)  1 相當於(yu) 大約 50μg/ml DNA。電泳可能為(wei) 單一條帶，也可能為(wei)  2 條或者多條 DNA 條帶，這主要是不同程度的超螺旋構象質粒泳動位置不一造成，與(yu) 提取物培養(yang) 時間長短、提取時操作劇烈程度等有關(guan) 。本公司產(chan) 品正常操作情況下基本超螺旋可以超過 90%。

7. 洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA，不影響下遊酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫， 但應該確保 pH 大於(yu)  7.5，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫質粒應該保存在-20℃。質粒DNA 如果需要長期保存，可以用 TE 緩衝(chong) 液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA， pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下遊酶切反應，使用時可以適當稀釋。

自備試劑：無水乙醇

操作步驟：

提示：

ð 第--次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指-*定量無水乙醇，充分混勻，加入後請及時在

方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!

ð 將 RNase A 全部加入溶液 P1 中，混勻，每次使用後置於(yu)  2-8℃保存。