通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒產(chan) 品說明書(shu) （中文版）

主要用途

GENMED通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑是一種旨在通過有機溶劑萃取，必要時皂化處理，進而在高效液相色譜儀(yi) 和紫外光譜下（294nm波長）檢測分析，分離出可溶性維生素E波峰，以定量測定樣品中α-生育酚的含量的權+_威而經典的技術方法。該技術經過精心研製、成功實驗證明的。其適用於(yu) 各種油類、植物、蔬菜、食品、血液等樣品中維生素E的檢測（包括α、β、γ、δ形式）。產(chan) 品嚴(yan) 格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。

技術背景

維生素E（vitamin E），又稱為(wei) 生育酚（tocophenol；TCP），是一種由各種甲基化的酚類構成的有機化合物，為(wei) 脂溶性抗氧化劑。維生素E分成8種形式：4種生育酚，4種生育三烯酚（Tocotrienols），分別有α、β、γ、δ。其中α-生育酚是維生素E中+*具活性，也是_+常見代表，在食物添加劑的命名上標記為(wei) E307。成年人的建議日攝入用量是15毫克。維生素E在植物、藻類等合成，而不能在動物中產(chan) 生。維生素E在麥類、素油、水果、果仁、魚、蔬菜等中含量豐(feng) 富，包括棕櫚油、橄欖油、豆油、奶油花生等。維生素E具有預防自發流產(chan) 、增強免疫功能、防止未飽和脂肪酸、低密度脂蛋白和細胞膜的氧化、清除自由基、預防冠心病等作用。維生素E缺乏將導致神經性疾患，例如脊髓小腦性共濟失調（spinocerebellar ataxia）、肌病（myopathies）、貧血等。通過有機溶劑萃取，必要時進行皂化處理，排除脂類、蛋白和碳水化合物的幹擾，進而在高效液相色譜儀(yi) 和紫外光譜下（294nm波長）檢測分析，分離出可溶性維生素E波峰，以定量α-生育酚的含量。

產(chan) 品內(nei) 容

GENMED處理液（Reagent A）       20毫升

GENMED皂化液（Reagent B）  20毫升

GENMED酸性液（Reagent C）       20毫升

GENMED萃取液（Reagent D）   100毫升

GENMED溶解液（Reagent E）       20毫升

GENMED流相液（Reagent F）      500毫升

GENMED標準液（Reagent G）    500微升

產(chan) 品說明書(shu)      1份

保存方式

保存GENMED標準液（Reagent G）在-20℃冰箱裏，其餘(yu) 的保存在4℃冰箱裏，避免光照；試劑具有揮發性，注意密閉瓶蓋；GENMED皂化液（Reagent B）和GENMED酸性液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用於(yu) 樣品處理和標準液配製的容器

15毫升錐形離心管：用於(yu) 樣品處理的容器

（微型）台式離心機：用於(yu) 樣品處理

DOUNCE勻漿器：用於(yu) 裂解樣品

恒溫水槽或培養(yang) 箱：用於(yu) 樣品反應孵育和晾幹

高效液相色譜儀(yi) （HPLC）：用於(yu) 定量測定

實驗步驟

• 樣品準備 

1）固態樣品準備

• 秤取50毫克待測固態樣品  
• 移入到一個液氮凍存管
• 即刻放進液氮罐過夜
• 次日從液氮罐裏取出，即刻（_+快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使樣品凍融）
• 加入500微升GENMED處理液（Reagent A）
• 全部轉移到DOUNCE勻漿器
• 用勻漿棒勻化組織（約80下）
• 全部轉移到1.5毫升離心管
• 放進微型台式離心機離心10分鍾，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到15毫升錐形離心管
• 再加入500微升GENMED處理液（Reagent A）到含有沉澱顆粒的1.5毫升離心管中
• 渦旋震蕩1分鍾
• 放進微型台式離心機離心10分鍾，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液合並到上述15毫升錐形離心管中（總量1毫升）
• （選擇步驟）加入1毫升GENMED皂化液（Reagent B）
• （選擇步驟）渦旋震蕩15秒
• （選擇步驟）放進70℃恒溫水槽孵育30分鍾，其間每隔10分鍾渦旋震蕩5秒一次
• （選擇步驟）置於冰槽裏冷卻1分鍾
• （選擇步驟）加入1毫升GENMED酸性液（Reagent C），混勻
• 加入4毫升GENMED萃取液（Reagent D）
• 強力渦旋震蕩15秒
• 重複實驗步驟21二次
• 放進台式離心機離心10分鍾，速度為1300g 
• 移取上層液相到新的15毫升錐形離心管
• 放進40℃幹式培養箱晾幹
• 加入500微升30℃預熱的GENMED溶解液（Reagent E），混勻
• 即刻進行高效液相色譜分析（注意：如果暫時保存，建議在4℃不超過48小時；-20℃不超過3月）

2）液態樣品準備

• 移取500微升待測液態樣品到1.5毫升離心管
• 加入500微升GENMED處理液（Reagent A） 
• 渦旋震蕩1分鍾
• 放進微型台式離心機離心10分鍾，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到15毫升錐形離心管中
• （選擇步驟）加入1毫升GENMED皂化液（Reagent B）
• （選擇步驟）渦旋震蕩15秒
• （選擇步驟）放進70℃恒溫水槽孵育30分鍾，其間每隔10分鍾渦旋震蕩5秒一次
• （選擇步驟）置於冰槽裏冷卻1分鍾
• （選擇步驟）加入1毫升GENMED酸性液（Reagent C），混勻
• 加入4毫升GENMED萃取液（Reagent D）
• 強力渦旋震蕩15秒
• 重複實驗步驟12二次
• 放進台式離心機離心10分鍾，速度為1300g 
• 移取上層液相到新的15毫升錐形離心管
• 放進40℃幹式培養箱晾幹
• 加入500微升30℃預熱的GENMED溶解液（Reagent E），混勻，避光
• 即刻進行高效液相色譜分析（注意：如果暫時保存，建議在4℃不超過48小時；-20℃不超過3月）

• 測定準備

• 開啟儀器預熱15分鍾
• 根據下表設置高效液相色譜儀（HPLC）參數

• 使用GENMED流相液（Reagent F）運行1次（30毫升），以達到色譜柱均衡和溫度穩定

• 標準樣品配製

• 準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管
• 分別加入100微升GENMED溶解液（Reagent E）到1至5號管
• 移取100微升GENMED標準液（Reagent G）到1號管，混勻
• 小心移取100微升1號管稀釋的GENMED標準液（Reagent G）到2號管，混勻
• 小心移取100微升2號管稀釋的GENMED標準液（Reagent G）到3號管，混勻
• 小心移取100微升3號管稀釋的GENMED標準液（Reagent G）到4號管，混勻
• 將1至5號管放進冰槽裏備用，避免光照；標準管濃度見下表

四、色譜分析

• 將上述配製的GENMED標準液（Reagent G）和待測樣品放進30℃培養箱預熱
• 每次（每個樣品）注射20微升
• 每次（每個樣品）運行10至20分鍾
• 獲得色譜波峰圖：波峰麵積（peak area）或峰值，保存記錄
• 全部運行完成，使用適量的GENMED流相液（Reagent F）清洗色譜柱

五、計算含量

• 方法一：通過儀器中的軟件進行測算
• 方法二：構建標準曲線：縱座標（Y軸）為波峰麵積（peak area）；橫座標（X軸）為標準α-生育酚濃度（微克/毫升），根據標準曲線獲得樣品對應α-生育酚濃度（微克/毫升）
• 方法三：公式計算（選擇單一濃度的標準液）

樣本α-生育酚濃度（微克/毫升）=【樣本波峰麵積（peak area）X標準α-生育酚濃度】÷對應標準α-生育酚濃度的波峰麵積

注意事項

• 本產品為20次操作
• 本產品可以用於β、γ、δ-生育酚的檢測
• 本產品檢測範圍是0.3至50毫克/升
• 操作時，須戴手套
• 試劑具有揮發性，注意密閉瓶蓋或使用封口膜
• 如果樣品中脂類含量高，建議皂化處理
• GENMED皂化液（Reagent B）和GENMED酸性液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全
• 建議使用GENMED溶解液（Reagent E）作為陰性對照或作為基準線
• 色譜柱的異物殘留、氣泡產生、溫度未達均衡等將導致異常波峰、時間偏移等
• 用戶可以使用已知濃度的GENMED標準液（Reagent G）或醋酸生育酚作為內參標準加入到樣品中，然後進行萃取，檢測回收率（recovery）
• α-生育酚的HPLC參考圖譜如下

• α-生育酚的出峰時間（retention）以用戶操作時，使用的GENMED標準液（Reagent G）實際出峰為準
• 用戶可以使用熒光檢測：激發波長290nm，散發波長330nm
• 本公司提供係列維生素檢測試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定檢測敏感

使用承諾

秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為(wei) 我們(men) 的用戶提供優(you) 質產(chan) 品和服務。用戶收到貨後，應按照產(chan) 品說明書(shu) 上的規定妥善保管並在有效期內(nei) 使用。我們(men) 的產(chan) 品在銷售前已作嚴(yan) 格的質量鑒定，保證說明書(shu) 所述的使用效果。在貨到後10天內(nei) 若發現確屬本產(chan) 品的質量問題，請立即以書(shu) 麵形式（實驗報告）與(yu) 本公司聯係，並將該產(chan) 品退回，經檢驗確係產(chan) 品質量所致，本公司負責更換產(chan) 品。如係使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

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編號 名稱 規格

GMS19071.2.1 GENMED通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒 20次

GMS19071.2.1A GENMED處理液（Reagent A）     100毫升

GMS19071.2.1B GENMED皂化液（Reagent B） 100毫升

GMS19071.2.1C GENMED酸性液（Reagent C）      100毫升

GMS19071.2.1D GENMED萃取液（Reagent D） 100毫升

GMS19071.2.1E GENMED溶解液（Reagent E） 100毫升

GMS19071.2.1F GENMED流相液（Reagent F） 500毫升

GMS19071.2.1G GENMED標準液（Reagent G）      10毫升

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