Bacterial Protein Extraction Kit
細菌蛋白抽提試劑盒
保存條件：Lysozyme、DNaseⅠ、Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它組分：室溫
產(chan) 品內(nei) 容
Component | K0888S | K0888M |
25 preps | 100 preps | |
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Bacterial Protein Extraction Reagent | 25 ml | 100 ml |
Protease Inhibitor Cocktail | 250 μl | 1 ml |
Lysozyme （50 mg/ml） | 50 μl | 200 μl |
DNaseⅠ（1,000 U/ml） | 25 μl | 100 μl |
產(chan) 品簡介
細菌蛋白抽提試劑使用溫和的非離子型去汙劑，適用於(yu) 大腸杆菌及昆蟲細胞表達的重組蛋白提取。提取過程中不需進行超聲破碎，有效避免了外源蛋白的汙染。本產(chan) 品可應用於(yu) 從(cong) 細菌裂解液中提取可溶性蛋白。細菌蛋白抽提試劑盒在抽提試劑的基礎上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑製劑混合物，可提高蛋白提取效率並減輕因DNA引起的粘稠現象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物學活性，可進行IP、Western blot、蛋白純化等下遊操作。
注意事項
1．本產(chan) 品適用於(yu) 從(cong) 新鮮或凍存細菌和昆蟲細胞中提取蛋白。
2．本品采用Tris緩衝(chong) 係統，蛋白提取後的純化操作，請使用相同的緩衝(chong) 係統。
3．使用本產(chan) 品獲得的蛋白裂解液，可用BCA或Bradford法進行蛋白定量。
4．對於(yu) 特殊的菌株，如果抽提效果不理想，可在抽提蛋白前冰凍樣品。
5．根據具體(ti) 情況，可在本產(chan) 品中加入蛋白酶抑製劑、鹽、螯合劑、還原劑等。
操作步驟
● 昆蟲細胞蛋白提取
1．低速離心收集細胞。每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入10 μl Protease Inhibitor Cocktail即為(wei) 1×工作液。
2．稱量細胞濕重，按10 ml/g的量加入1×工作液。
3．重懸後，冰上孵育20分鍾（冰上放置時間應根據細胞類型不同進行調整）。
4．15,000×g離心15分鍾，分離可溶性蛋白。
● 細菌可溶性蛋白提取
1．5,000×g離心10分鍾，收集菌體(ti) 。
2．可選步驟：每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入1 μl DNase I（1,000 U/ml）、 2 μl Lysozyme（50 mg/ml）和10 μl Protease Inhibitor Cocktail，渦旋震蕩混勻。
3．按照每克菌體(ti) 沉澱加入20 ml Bacterial Protein Extraction Reagent的比例，向菌體(ti) 沉
澱中加入抽提液，充分渦旋或用移液器上下吹打直至菌體(ti) *重懸。
4．重懸後，室溫孵育10-15分鍾（放置時間應根據細胞類型不同進行調整）。
5．15,000×g離心5分鍾。
6．轉移上清至新的離心管中（上清中即為(wei) 可溶性蛋白），進行蛋白定量及下遊實驗。
注意：如目的蛋白以包涵體(ti) 形式存在，可使用包涵體(ti) 蛋白溶解液（K0007）進行溶解或優(you) 化表達
條件增加可溶性蛋白的表達。
常見問題
問題 | 可能原因 | 解決(jue) 方法 |
目的蛋白不溶 | 目的蛋白表達為(wei) 包涵體(ti) | 優(you) 化表達條件或使用包涵體(ti) 蛋白溶解液 |
在蛋白抽提試劑中加入 Lysozyme 和 DNase I | ||
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加入Lysozyme 後目的蛋白 | 溫度過低 | 將使用試劑恢複至室溫 |
仍沒有提取出來 | Lysozyme 活性降低或失活 | 加入更多的 Lysozyme 或更換新的酶 |
提取物粘度高 | DNase I 活性降低或失活 | 加入更多的 DNase I 或更換新的 DNase I |
將鎂離子的終濃度增加至 2 mM | ||
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蛋白抽提後仍有大部分蛋 | 蛋白量過大 | 加入 Lysozyme 及 DNase I |
白存在於(yu) 沉澱中 | ||
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蛋白抽提試劑有沉底析出 | 溫度過低 | 將蛋白抽提試劑恢複至室溫 |
本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途
實驗代做服務：
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