植物（Plant）類黃酮(Flavonoids)
ELISA檢測試劑盒
使用說明書(shu)
檢測原理
試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被的微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體(ti) ，經過溫育並*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的類黃酮(Flavonoids)呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為(wei) 疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑製劑。
2. 標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行。
3. 植物萃取液或其它相關(guan) 樣本：請1000 x g離心20分鍾，取上清即可檢測。
4. 保存：如果樣本收集後不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存於(yu) -20℃，避免反複凍融，在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
- 酶標儀（450nm）
- 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
- 37℃恒溫箱
操作注意事項
- 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鍾。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬於正常現象，水浴加熱使結晶*溶解後再使用。
- 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫幹燥）保存。
- 濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍，終結果乘以5才是樣本實際濃度。
- 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
- 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 |
標準品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體(ti) -HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩衝(chong) 液 | 25mL | 15mL | 按說明書(shu) 進行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書(shu) | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個(ge) | 1個(ge) | 無 |
注：標準品（S0-S5）濃度依次為(wei) ：0、1.25、2.5、5、10、20 mg/L
試劑的準備
20×洗滌緩衝(chong) 液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩衝(chong) 液加19份的蒸餾水。
洗板方法
- 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min後甩盡孔內液體，在吸水紙上拍幹，如此洗板5次。
- 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
- 從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條，剩餘板條用自封袋密封放回4℃。
- 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
- 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
- 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
- 棄去液體，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板5次（也可用洗板機洗板）。
- 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
- 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
繪製標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪製出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
實驗代做服務：
| |||
|
| ||
| |||
|
