丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量試劑盒說明書(shu)

可見分光光度法

正式測定前務必取 2-3 個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：

氧自由基作用於(yu) 脂質的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質；後者逐漸分解為(wei) 一係列複雜的化合物，其中包括 MDA。通過檢測 MDA 的水平即可檢測脂質氧化的水平。

測定原理：

MDA 與(yu) 硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成紅色產(chan) 物，在 532nm有大吸收峰，進行比色後可估測樣品中過氧化脂質的含量；同時測定 600nm 下的吸光度，利用 532nm與(yu) 600nm 下的吸光度的差值計算 MDA 的含量。

需自備的儀(yi) 器和用品：

可見分光光度、水浴鍋、台式離心機、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配置：

提取液：液體(ti) 60mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體(ti) 30mL×1 瓶，4℃保存；

注意事項：

臨(lin) 用前注意試劑一是否*溶解，如未溶解，可以 70℃加熱，並振蕩以促進溶解。

MDA 提取：

1、細菌、細胞或組織樣品的製備：

細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1 的比例（建議500萬(wan) 細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重複30次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、吸取 0.6mL試劑一於(yu) 1.5mL 離心管中，再加入0.2mL 樣本, 混勻。

2、95℃水浴中保溫 30min（蓋緊，防止水分散失），置於(yu) 冰浴中冷卻，10000g，25℃，離心

10min。

3、吸取上清液於(yu) 1mL玻璃比色皿中，測定532nm和600nm處的吸光度，記為(wei) A532 和A600，

ΔA= A532-A600。（蒸餾水調零）

MDA 含量計算：

1、血清（漿）中 MDA 含量的計算：

MDA 含量(nmol/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10⁹]÷V 樣=25.8×ΔA

2、細菌、細胞或動物組織中 MDA 含量計算

（1）按照蛋白濃度計算

MDA 含量(nmol/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10⁹]÷(Cpr×V樣)=25.8×ΔA ÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。

（2）按照樣品質量計算

MDA 含量(nmol/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V 樣÷V 樣總)

=25.8×ΔA ÷W

(3) 按照細菌或細胞密度計算：

MDA 含量(nmol/10⁴ )=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V 樣÷V 樣總)

=0.0516×ΔA

V 反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，8×10^-4 L；ε：丙二醛摩爾消光係數，155×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體(ti) 積，0.2 mL；V 樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500 萬(wan) 。

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