Tricine-SDS-PAGE凝膠製備試劑盒說明書(shu)
Tricine-SDS-PAGE Gel Kit
Tricine-SDS-PAGE凝膠製備試劑盒
目錄號：K2384
組分說明及保存條件
Cat. No. K2384
保存條件
Size 約 50塊膠
49.5%T 3%C 30 ml 2-8ºC
49.5%T 6%C 100 ml 2-8ºC
凝膠緩衝(chong) 液 140 ml 2-8ºC
甘油 30 ml 室溫
APS 0.5 g 室溫
TEMED 750 ul 室溫，避光
本產(chan) 品所提供的 APS（過硫酸銨）為(wei) 固體(ti) 粉末，使用前加入雙蒸水溶解即配製成10%APS溶液（0.5 g APS加5 ml雙蒸水），將溶液分裝後置於(yu) -20℃保存，通常半年內(nei) 有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩(liang) 周。
本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途
產(chan) 品簡介
常規的Tris-SDS-PAGE電泳的隻能分辨大分子蛋白，對於(yu) 相對分子量小的，尤其
是10 kD以下的蛋白分辨率極低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分離分子量在1-10 kD
的蛋白及多肽，成為(wei) 目前電泳法變性分離多肽的主要方法。本產(chan) 品包括Tricine-SDS-
PAGE凝膠製備所需全套試劑，隻需自備蒸餾水，即可製備高質量各種濃度的凝膠，方
便、快捷，電泳後可直接用於(yu) 考染、銀染、Western雜交等實驗。
注意事項
1. 10%APS配製後分裝-20度保存。APS溶液不穩定，應盡量減少室溫存放時間，每
次取用後立即放回冰箱，以防失效；若發現凝膠聚合時間延長，應考慮更換，使用
-20度保存的10%APS。
2.在凝膠配製過程中，尤其是液體(ti) 混勻步驟，應盡量避免氣泡的產(chan) 生。
3.在分離膠上層加蒸餾水時要小心操作，加水時速度不能太快。
4.丙烯酰胺具有神經毒性，操作時請穿著實驗服並佩戴一次性手套。
5.本產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研，不能用於(yu) 人體(ti) 實驗或人體(ti) 治療。
操作步驟
根據目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配製濃度，凝膠濃度配方參考附表。
I 配製分離膠
1．將不同體(ti) 積的雙蒸水、49.5%T 6%C、凝膠緩衝(chong) 液和甘油加入到離心管中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即渦旋混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
3．在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液（1 mm mini-gel，分離膠溶液加約4 ml），
然後在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的水層，使凝膠表麵保持平整。
4．靜置，待分離膠和水層之間出現一個(ge) 清晰的界麵表示凝膠已聚合。
II 配製夾層膠
去除覆蓋在分離膠上的水層，用濾紙將殘留的水盡量吸去。
1．將不同體(ti) 積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩衝(chong) 液加入到離心管中混合。
2．加入10%過硫酸銨和TEMED，立即渦旋混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
3．將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上麵（對於(yu) 1 mm的mini-gel，夾層膠溶液加
約1 ml ），然後在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層，使凝膠表麵保持平整。
4．靜置，待夾層膠和水層之間出現一個(ge) 清晰的界麵表示凝膠已聚合。
III 配製濃縮膠
去除覆蓋在夾層膠上的水層，用濾紙將殘留的水吸去。
1．將不同體(ti) 積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩衝(chong) 液加入到離心管中混合。
2．加入10%過硫酸銨和TEMED，立即渦旋混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
3．將梳子插入凝膠內(nei) ，避免產(chan) 生氣泡。
4．待凝膠聚合後，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。
5．進行電泳操作。
IV 電泳
將電泳槽放入4℃或冰水浴中，外槽加入陽極緩衝(chong) 液（K2388），內(nei) 槽加入陰極緩衝(chong) 液（K2387），30V預電泳10 min，將樣品（已經過Tricine上樣緩衝(chong) 液YJ2385處理）加入點樣孔後30V電泳1小時，100V電泳至溴酚藍到達膠底部後停止電泳，進行後續的考馬斯亮藍染色或電轉。
實驗代做服務：
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