土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC）試劑盒說明書(shu)
微量法
產(chan) 品內(nei) 容：
試劑一：甲苯1mL×1 瓶，4℃保存；（自備）
試劑二：液體(ti) 7.5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨(lin) 用前每瓶加入22mL 蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存；
試劑四：液體(ti) 22mL×1 瓶，4℃保存。
產(chan) 品說明：
S-SC 能夠水解蔗糖變成相應的單糖而被機體(ti) 吸收，其酶促作用產(chan) 物與(yu) 土壤中有機質、氮、
磷含量，微生物數量及土壤呼吸強度密切關(guan) ，是評價(jia) 土壤肥力的重要指標。
S-SC 催化蔗糖降解產(chan) 生還原糖，進一步與(yu) 3,5－二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物，在510nm 有特征光吸收，在一定範圍內(nei) 510nm 光吸收增加速率與(yu) S-SC 活性成正比。
自備用品：
可見分光光度計/酶標儀(yi) 、台式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研缽、冰、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。
操作步驟：
一、加樣表：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
風幹土樣（g） | 0.03 | 0.03 |
試劑一（μL） | 5 | 5 |
振蕩混勻，使土樣全部濕潤，37℃水浴15min | ||
試劑二（μL） | 75 | 75 |
試劑三（μL） | 220 |
|
蒸餾水（μL） |
| 220 |
充分混勻，放入37℃水浴培養(yang) 24 小時，10000 g，4℃，離心5min，取上清液 | ||
上清液（μL） | 85 | 85 |
試劑四（μL） | 215 | 215 |
充分混勻，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，蒸餾水稀釋10倍（可以吸取100μL，加入900μL 蒸餾水稀釋；若吸光度大於(yu) 4，可以加大稀釋倍數），取200uL 至微量石英比色皿或96 孔板中510nm 處讀吸光值A。計算ΔA=A測定管-A對照管。每個(ge) 測定管需設一個(ge) 對照管。
二、S-SC 活性計算：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為(wei) y = 4.9x -0.062；x 為(wei) 標準品濃度（mg/mL），y 為(wei) 吸光值。
單位的定義(yi) ：每天每g 土樣中產(chan) 生1mg 還原糖定義(yi) 為(wei) 一個(ge) S-SC 活力單位。
S-SC 活力(U /g 土樣)=(A+0.062) ÷4.9×10×V 反總÷W÷T =20.4×(A+0.062)
10：稀釋倍數；T：反應時間，1d； V 反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積：0.3mL；W：樣本質量，0.03g。
b. 用96 孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為(wei) y = 2.45x -0.062；x 為(wei) 標準品濃度（mg/mL），y 為(wei) 吸光值。
單位的定義(yi) ：每天每g 土樣中產(chan) 生1mg 還原糖定義(yi) 為(wei) 一個(ge) S-SC 活力單位。
S-SC 活力(U /g 土樣)=(A+0.062) ÷2.45×10×V 反總÷W÷T =40.8×(A+0.062)
10：稀釋倍數；T：反應時間，1d； V 反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積：0.3mL；W：樣品質量，0.03g。
