Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書(shu)

Super-BradfordProteinAssayKit                                                       

Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書(shu)



Cat.No. K0013                         

 

保存：2-8℃

組分說明



Catalogno.                                 K0013

KitSize                                800 次/微孔，100 次/試管

BradfordProteinAssayReagent               200ml

BSA 標準液（2mg/ml）                          2ml



產(chan) 品簡介

    Bradford 法是簡dan和快速的比色蛋白定量方法。這一方法基於(yu) 考馬斯亮藍 G-250 與(yu) 蛋白質結合後，產(chan) 生藍色化合物，反應迅速而穩定。反應化合物在 465-595nm 處有大的光吸收值，化合物顏色的深淺與(yu) 蛋白濃度的高低成正比關(guan) 係，因此可通過檢測 595nm 的光吸收值的大小來計算蛋白的含量。本產(chan) 品將傳(chuan) 統的 Bradford 方法進行了改良，大限度的加大蛋白定量的線性範圍，變異性小於(yu) 普通考馬斯亮藍染色法，靈敏度範圍為(wei) 100-1,500 μg/ml。使用本產(chan) 品反應迅速，顏色產(chan) 物 1 小時內(nei) 保持穩定。本試劑盒適用於(yu) 多種緩衝(chong) 液係統，不受金屬離子、還原劑和螯合劑的幹擾。

注意事項 

 1.  如待測樣品中含較多的幹擾物質（具體(ti) 見附表 1），可采用 BCA 蛋白定量試劑盒（K0014）或其他蛋白定量產(chan) 品。

 2.  BSA 標準品的稀釋液需與(yu) 待測樣品的稀釋液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進行稀釋）。

 3.  本試劑盒不適合含有去汙劑的蛋白定量，所測蛋白分子量必須大於(yu) 3kD。

 4.  操作中請佩戴手套。

 5.  本產(chan) 品僅(jin) 限科研使用。



操作步驟（以大腸杆菌表達係統為(wei) 例）

 1.  稀釋 BSA 標準品：用與(yu) 待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標準品。

 

                                                

管號    稀釋液用量（μl）   BSA標準品用量（μl）    BSA標準品終濃度（μg/ml）

                                                 

A                 0                 100                2,000

B                50                 150                1,500

 

C                200                200                1,000

 

D                200         200（從(cong) C管中取）          500

E                200         200（從(cong) D管中取）          250

F                200         200（從(cong) E管中取）           125

G                200                 0                 0(空白)

 

 2.  試管檢測（檢測範圍：100-1500 μg/ml）

    1）按上表稀釋標準品，將 30 μl 稀釋好的 BSA 標準品分別加到作好標記的試管中。 

    2）取幹淨的試管，分別加入 30 μl 待測蛋白樣品(原液或稀釋液)，並作好標記，推薦每個(ge) 測定做 2-3 個(ge) 平行反應。

    3）向步驟 1）和步驟 2）的試管中各加入 1.5mlBradfordProteinAssayReagent，充分混勻，室溫放置 10 分鍾。

    4）用分光光度計測定 595nm 處的吸光值。

    5）繪製標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。

        注意：數據處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從(cong) 標準曲線中查得, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。如果是計算機繪製得曲線，可以從(cong) 計算機給出的線性方程式計算出未知樣品的濃度。

    6）如果所得到的蛋白濃度不在檢測範圍內(nei) ，請重新稀釋樣品後再次測定。

 3.  微孔檢測（檢測範圍：100-1500 μg/ml）

    1）將按表 1 稀釋好的 A-GBSA 標準品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各 5 μl 分別加到作好標記的 96 孔板微孔中。 

    2）每孔加入 250 μlBradfordProteinAssayReagent，充分混勻，蓋上 96 孔板蓋，室溫放置 10 分鍾。

    4）用酶標儀(yi) 測定 595nm 處的吸光值。

    5）繪製標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。

        注意：數據處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從(cong) 標準曲線中查得, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。如果是計算機繪製得曲線，可以從(cong) 計算機給出的線性方程式計算出未知樣品的濃度。

    6）如果所得到的蛋白濃度不在檢測範圍內(nei) ，請重新稀釋樣品後再次測定。

  

 附表

                                               附表 1. 幹擾物質表

                                                         

化合物             耐受濃度              化合物             耐受濃度

         緩衝(chong) 液                            去垢劑和變性劑

乙酸鹽               0.6M            Brij35            幹擾

甘氨酸               0.1M          脫氧膽酸納              0.25%

HEPES             0.1M            CHAPS              1%

MES              0.7M            NP-40             幹擾

MOPS              0.2M            辛葡糖                2%

Na + -檸檬酸               50mM              SDS              0.1%

      

PIPES          500mM           Tween-20            幹擾

磷酸鈉/磷酸鈉                1M          TritonX-100         0.1%

乙酸鈉               0.6M                      糖類

Tris             2M              蔗糖               1mM

鹽類                                螯合劑

硫酸銨                1M              EDTA           100mM

NaCl              1M              EGTA            50mM

尿素                6M                         

極性化合物                                 其他

甘油               99%               HCl             0.1M

還原劑                       NaOH              0.1M

β-巰基乙醇               1M              NAD              1mM

DTT               1M               苯                5%