非洲綠猴腎細胞(Vero E6)

細胞特性

1） 來源：非洲綠猴正常腎

2） 形態：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10⁶

4） 汙染：支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測為(wei) 陰性

5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式：（1）幹冰運輸，收到後立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接複蘇；（2）存活細胞，收到後應繼續生長，傳(chuan) 代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體(ti) 操作見細胞培養(yang) 步驟。

收到細胞後請拍照，3天內(nei) 如果發現汙染，請及時拍照與(yu) 我們(men) 聯係。

細胞用途：僅(jin) 供科研使用。

細胞接收後的處理：

1） 收到細胞後，請檢查發貨培養(yang) 瓶的狀況，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，hao在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳(chuan) 代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 細胞需要售後時提供收到細胞時細胞狀態的依據。

3） 觀察好細胞狀態後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會(hui) 有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落後抱團生長，可將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養(yang) 基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鍾，棄去上清重懸後接種到加有按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的*培養(yang) 基的原培養(yang) 瓶中（或新的培養(yang) 瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養(yang) 基和細胞1000rpm離心5分鍾，棄去上清重懸後接種到新的培養(yang) 瓶中（加入按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的*培養(yang) 基）。

6）備注：運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的*培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。  收到細胞後第yi次傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代 。                       

細胞培養(yang) 步驟

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養(yang) 基；優(you) 質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。

2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

對於(yu) 貼壁細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。

注：第yi次傳(chuan) 代推薦傳(chuan) 代比例為(wei) 1:2，以後傳(chuan) 代比例可根據客戶需要自己決(jue) 定。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下麵T25瓶為(wei) 類；

      1，細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS清洗一遍後加入1ml胰酶，細胞變圓脫落後，加入1ml含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。

      2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為(wei) 10%，細胞密度不低於(yu) 1x10⁶/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

      3，將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項：

1. 收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。

2. 所有動物細胞均視為(wei) 有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台內(nei) 操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟(diu) 棄。