HiFiScript快速去基因組cDNA 一鏈合成試劑盒
目錄號：K2582
保存條件：-20℃。
規格說明
Cat. No. | K2582-25 | K2582-100 |
Kit Size | 25 | 100 |
gDNA Eraser | 12.5 µl | 50 µl |
10×gDNA Eraser Buffer | 30 µl | 120ul |
HiFiScript，200 U/μl | 25ul | 100ul |
5×RT Buffer | 120ul | 500ul |
Primer Mix | 30ul | 120ul |
RNase-Free Water | 1ml | 2×1 ml |
本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途
操作步驟
將模板RNA在冰上解凍；試劑盒組分在室溫解凍後立刻置於(yu) 冰上。使用前將每種溶
液渦旋振蕩混勻，並經短暫離心後使用。
一、去除基因組DNA反應
1．根據以下表格在冰上配製反應體(ti) 係，總體(ti) 積為(wei) 10 μl。為(wei) 了保證反應液配製的準確性，先按反應數+2的量配製預混體(ti) 係，然後再分裝到每個(ge) 反應管中，後加入RNA樣品。
試劑 | 10 μl反應體(ti) 係 |
10×gDNA Eraser Buffer | 1 µl |
gDNA Eraser | 0.5 µl |
RNA Template | 10 pg-1 μg |
RNase-Free Water | up to 10 µl |
注意：1）如果總RNA量大於(yu) 1 µg，請按比例擴大反應體(ti) 係。若起始RNA的量小於(yu) 50 ng，則建議加入RNA酶抑製劑（RNasin），該產(chan) 品貨號為(wei) K0596。
2．渦旋震蕩混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
3．42℃孵育2分鍾（室溫反應時，可以延長到30分鍾）。
4．反應結束後，短暫離心，置於(yu) 冰上冷卻。
二、逆轉錄反應
1．根據以下表格在冰上配製反應體(ti) 係，反應液配製請在冰上進行。為(wei) 了保證反應液配置的
準確性，先按數+2的量配製成預混溶液，然後再分裝 10 μl到每個(ge) 反應管中，取配製的
預混液10 μl加入至已完成去基因組的步驟1反應管中。
試劑 | 20μ反應體(ti) 係 |
步驟1反應液 | 10ul |
HiFiScript，200 U/μl | 1ul |
Primer Mix | 1ul |
5×RT Buffer | 4ul |
RNase-Free Water | 4ul |
注意：1） 可根據實驗需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建議20 μl 反應體(ti) 係
Oligo-dT Primer 50pmol，或Gene Specific Primer 2 pmol。
產(chan) 品簡介
本產(chan) 品是用於(yu) 去除基因組DNA進行反轉錄的試劑盒。該試劑盒在42℃，2 min即可
除去基因組DNA。同時由於(yu) 反轉錄試劑中含有抑製gDNA Eraser的組分，經過gDNA
Eraser處理後的樣品可以直接進行逆轉錄反應合成cDNA。本試劑盒配有新型高效反轉
錄酶HiFiScript，新穎突變位點大幅提升酶的轉錄活性，cDNA *一鏈合成的效率和產(chan)
量更高，可利用pg級的總RNA或mRNA合成cDNA*一鏈。如逆轉錄產(chan) 物cDNA用於(yu) 下
遊熒光定量檢測，可在42℃，15min完成逆轉錄反應。本試劑盒適用於(yu) *一鏈 cDNA的
合成和後續的RT-PCR、RT-qPCR、以及全長cDNA文庫的構建等。
產(chan) 品特點
1．快速去除基因組：含有去除基因組DNA的gDNA Eraser，隻需 2 min即可除去基因
組DNA。
2．快速逆轉錄：15分鍾即可獲得熒光定量PCR模板cDNA*一鏈合成。
3．靈敏度高：可利用pg級總RNA或mRNA模板合成cDNA*一鏈。
4．高效的逆轉錄效率：新穎突變位點大幅提升酶活性能，獲得更高產(chan) 量的cDNA。
注意事項
1．在操作過程中應避免RNase汙染，防止RNA降解或實驗中的交叉汙染，建議操作人
員帶kouzhao和一次性手套並經常更換手套，使用專(zhuan) 門的儀(yi) 器和耗材。
2．逆轉錄體(ti) 係配製在冰上進行操作，防止RNA發生降解。試劑盒的酶使用後盡快置於(yu)
-20 ºC保存，並盡量避免反複凍融。
3．反應體(ti) 係可倍比放大，10 μl反應體(ti) 係可大使用1μg總RNA。
4．Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配製而成，也可根據實驗需要選用
Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。
5．若起始RNA的量小於(yu) 50 ng，建議加入RNA酶抑製劑（RNasin）。本試劑盒並未提
供，如需要可單獨向本公司訂購，貨號為(wei) K0596。
6．對於(yu) 二級結構複雜的RNA模板，建議在操作步驟之前，將模板RNA在65℃孵育5分
鍾立刻置於(yu) 冰上，短暫離心後進行下一步操作。
2．混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
3．cDNA合成反應條件：
1）若下遊進行熒光定量PCR檢測，42℃孵育15分鍾，85℃孵育5分鍾。
2）若下遊進行普通PCR檢測，42℃孵育30-50分鍾，85℃孵育5分鍾。
注意：對於(yu) 二級結構複雜或GC含量高的模板，可以提高逆轉錄溫度至50℃，增強逆轉錄效率。
4．反應結束後，短暫離心後置於(yu) 冰上，再進行後續PCR或熒光定量PCR，如果需要長時
間保存，請置於(yu) -20℃。
注意：進行Real-time PCR反應時，逆轉錄產(chan) 物的加量應不超過PCR反應總體(ti) 積的1/10。
實驗代做服務：
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