大鼠熱休克蛋白-20（HSP-20）ELISA試劑盒說明書(shu)
本試劑僅(jin) 供研究使用 目的：本試劑盒用於(yu) 測定大鼠血清，血漿，細胞上清及相關(guan) 液體(ti) 樣本中熱休克蛋白-20（HSP-20）的含量。
熱休克實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中大鼠熱休克蛋白-20（HSP-20）水平。用純化的大鼠熱休克蛋白-20（HSP-20）抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被單抗的微孔中依次加入熱休克蛋白-20（HSP-20），再與(yu) HRP標記的HSP-20抗體(ti) 結合，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的HSP-20呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠熱休克蛋白-20（HSP-20）濃度。
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鍾，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉澱，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為(wei) 抗凝劑，混合10-20分鍾後，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yang) 上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nei) 的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wan) /ml左右。通過反複凍融，以使細胞破壞並放出細胞內(nei) 成份。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本後，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘(yu) 冷凍備用。
6. 標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
10. 如與(yu) 英文說明書(shu) 有異，以英文說明書(shu) 為(wei) 準。
計算：
以標準物的濃度為(wei) 橫坐標，OD值為(wei) 縱坐標，
在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD
值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋
倍數；或用標準物的濃度與(yu) OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值
代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數，即為(wei) 樣品的實際濃度。 （此圖僅(jin) 供參考）
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與(yu) 預期濃度相關(guan) 係數R值為(wei) 0.92以上。
2.批內(nei) 與(yu) 批見應分別小於(yu) 9%和15%
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(ge) 月
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