Magbind Gel Extraction Kit

磁珠法瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

目錄號：K2515

運輸條件：室溫（15-25℃）。

保存條件：Magbeads  2-8℃，其他組分室溫。

組分說明

本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途

產(chan) 品簡介

　　本試劑盒提供了一種簡單、快速、高效的用於(yu) 瓊脂糖凝膠  DNA回收的方法。它可

以從(cong) 用TAE或TBE製成的瓊脂糖凝膠中回收100 bp以上的DNA片段，回收效率高達80%。

溶膠液將瓊脂糖膠溶解後，磁珠選擇性的吸附 DNA片段。經漂洗後，洗脫得到的 DNA

純度良好，可用於(yu) 測序、酶切、PCR、克隆等下遊實驗。

　　該試劑盒可與(yu) 液體(ti) 工作站或KingFisher核酸提取儀(yi) 配套使用，簡單、快速的進行大

規模提取，大大降低了實驗者的工作量和實驗中的人為(wei) 誤差。

說明

Time for1 sample      Time for 96 samples

Sampletype     Typical yield   DNA size      (handle)                 (BioRobot)

 Agarose Gel    Up to 80%    100 bp plus     40 min                  1-2 hour

實驗前準備及重要注意事項

1. Magbeads嚴(yan) 禁冰凍 、離心。水凍和離心可能會(hui) 對Magbeads造成不可逆的損害。

2.電泳時使用新的電泳緩衝(chong) 液，以免影響電泳和回收效果。

3.切膠時，紫外照射時間應盡童短，以免對DNA造成損傷(shang) 。

4.第---次使用前應按照試劑瓶標簽說明在Buffer MW1中加入無水乙醇並做好標記。

5. Magbeads在使用前一定要渦旋震蕩2啾使其充分混勻。

6.如Buffer MG中出現沉澱，請在56C水浴鍋中重新溶解，搖勻後即可使用。

7.實驗步驟4、6、8和12中用Thermomixe!震蕩的目的是為(wei) 使磁珠充分懸浮於(yu) 溶液中，

以便使磁珠能夠充分吸附核酸，將磁珠表麵的雜質充分去除或將核酸從(cong) 磁珠表麵充

分洗脫。不同廠家生產(chan) 的Thermomixe震蕩效果不同，如1400 rpr時不能使磁珠充

分混勻，請調節震蕩頻率直至磁珠能夠充分混勻。

自備試劑

1.加熱恒溫混勻儀(yi) 一建議使用 Thermo Fisher設計生產(chan) 的Thermomixero

2.磁力架一建議使用DynaMag"M_

3.無水乙醇、75%乙醇。

操作步驟

1.在長波紫外燈照射下將目的條帶從(cong) 瓊脂糖凝膠中切下(盡童去除多餘(yu) 瓊脂糖膠)，

稱重後將其放入幹淨的1.5 m離心管中。

2.向上-步的離心管中加入3倍膠體(ti) 積的Buffer MG (如果膠塊重0.1 g, 其體(ti) 積視為(wei)

100!)後，將其放入50C、1400 rpr的Thermomixe中震蕩溶膠10分鍾。

注意:如無Thermomixer.可將高心管放於(yu) 50仁水浴鍋或金屬浴中孵有10分鍾。期間每隔2分鍾渦旋展蕩5秒鍾。

3.將上-步的離心管從(cong) Thermomixe中取下，檢測腋塊是否*融化以及溶液是否由黃

色變成紫色(如膠塊未*溶解，繼續在Thermomixer中震蕩融解5分鍾;如溶液變

成紫色，向離心管中加入10以3 M的醋酸鈉溶液)。短暫離心後將其室溫放置5分鍾。

4.向上-步離心管中加入20以Magbeads, 渦旋震蕩5秒鍾後將其放入25C、1400 rpml

的Thermomixe中震蕩結合5分鍾。

注意: 1) 如果溶液總體(ti) 積大於(yu) 1ml.每增加100p!可向高心管中多加入2 y的Megbeds:如果溶

液總體(ti) 積小於(yu) 0.5 ml.可將Magbends的用量減少至10 以

2)如無Themomiser.可將高心管連續額倒混勻10分鍾。

5.將上- -步的離心管放於(yu) 磁力架上靜置1份鍾，待Magbeads*吸附於(yu) 離心管的側(ce) 壁

上後*棄去溶液(保持離心管固定於(yu) 磁力架上)，期間避免接觸Magbeadso

6.向離心管中加入500以Buffer MW1 (加入前檢測是否已加入無水乙醇)後，將離心

管從(cong) 磁力架上取下，渦旋震蕩秒鍾後放入25C、1400 rpr的Thermomixe中震蕩3分鍾。

注意:如無Thermomixer. 可將高心管渦旋層蕩10秒鍾使Megbead流分懸浮於(yu) 源洗液中。

7.將上- 步的離心管放於(yu) 磁力架上靜置1份鍾，待磁珠*吸附於(yu) 離心管側(ce) 壁上後輕

輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質洗落後*棄去溶液(保持離心管固定於(yu) 磁力架

上)，期間避免接觸Magbeadso

注意:棄去溶液時。如高心管董上有殘留溶液。需用移液器進一步去除。

8.向離心管中加入600 μl 75%的乙醇後，將離心管從(cong) 磁力架上取下，渦旋震蕩5秒鍾後

放入25C、1400 rpm的Thermomixe中震蕩3分鍾。

注意:如無Thermomixer. 可將高心管滿旋層蕩10秒鍾使Magbeads充分懸浮於(yu) 漂洗液中。

9.將上一步的離心管放於(yu) 磁力架 上靜置1份鍾，待磁珠*吸附於(yu) 離心管側(ce) 壁上後輕輕

顛倒磁力架，將離心管蓋上的雜質洗落後*棄去溶液(保持離心管固定於(yu) 磁力架

上)，期間避免接觸Magbeads。

注意:棄去溶液時。如高心管蓋上有殘留溶液。需用移液暴進一步去除。

10.重複步驟8-9。

11.保持離心管固定磁力架上，用10ul移液器進一步去除離心管管底和管蓋上的溶液後室溫放置10分鍾。

12．向離心管中加入30-100 μl Buffer EB或去離子水，將離心管從(cong) 磁力架上取下，渦旋

震蕩使Magbeads*懸浮於(yu) 洗脫液後將其放入65℃、1400 rpm的Thermomixer中震蕩洗脫10分鍾。

注意：如無Thermomixer，可將離心管放於(yu) 65℃水浴鍋或金屬浴中孵育10分鍾，期間每隔2分鍾渦旋震蕩5秒鍾。

13．將上一步的離心管放置於(yu) 磁力架上靜置 2分鍾，待Magbeads*吸附後用移液器

將洗脫液轉移至新的離心管中-20℃保存備用，此時可以棄去Magbeads。

純化回收得率的計算

　　我們(men) 建議通過瓊脂糖電泳純化前後的樣品進行回收得率的計算。不建議通過260

nm處的光吸收值來計算回收得率。因為(wei) 溶液中單鏈、雙鏈 DNA和dNTP以及一些純化

前的某些雜質在260 nm處都有光吸收，這樣在計算回收前樣品中 DNA濃度時會(hui) 得到一

個(ge) 假的、虛高的DNA濃度值。