A型口蹄疫抗體(ti) 檢測試劑盒

使用說明書(shu)

【介紹】

A型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV）抗體(ti) 檢測試劑盒可用於(yu) 檢測豬、牛、羊血清中的A型口蹄疫病毒抗體(ti) ，用於(yu) 評估A型口蹄疫苗免疫狀況。

本試劑盒采用間接ELISA法，在酶標板條微孔上預包被純化的FMD病毒抗原。在試驗中，加入稀釋後的待檢血清，經過溫育後，若樣品中含有FMD病毒特異性抗體(ti) ，則與(yu) 包被板上的抗原結合，經洗滌除去未結合的抗體(ti) 和其他成分後；再加入酶結合物，與(yu) 檢測板上的抗原抗體(ti) 複合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶結合物；在微孔中加入TMB底物液，經酶催化形成藍色產(chan) 物，加入終止液終止反應後，用酶標儀(yi) 450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。

【組份】

【需自備的設備及試劑】

微量移液器： 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。

一次性移液器吸頭。量筒：500ml。96孔板酶標儀(yi) 。蒸餾水或去離子水。洗瓶或洗板機。

【樣品製備】

取動物全血，按常規方法製備血清，要求血清清亮，無溶血。

【洗滌液的準備】

濃縮洗滌液使用前應恢複至室溫，如有鹽結晶，搖動使結晶的鹽溶解，然後用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

【樣品的稀釋】

在血清稀釋板中按1：100的體(ti) 積比稀釋待檢血清。

注意：陰性和陽性對照不用稀釋。取每個(ge) 樣品後都要更換吸頭，準確記錄每個(ge) 樣品在板上的位置。每個(ge) 樣品在加入到包被板微孔前應充分混勻。

【注意事項】

試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫，應將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應搖勻，使用後放回2-8℃。

不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時應防止試劑汙染。

底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時應該注意防護。

TMB（顯色液）不要暴露於(yu) 強光和避免接觸氧化劑。

檢測板拆封後應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加幹燥劑放於(yu) 自封袋中，並盡快置於(yu) 2-8℃)。

所有廢棄物在丟(diu) 棄之前應合理處理以免汙染。

嚴(yan) 格遵守操作說明可以獲得zui好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

血清稀釋板為(wei) 一次性用品，不得重複使用；血清稀釋板的大容量為(wei) 300μl/孔。

【操作步驟】

取預包被的檢測板（根據樣品多少，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時設陰性對照和陽性對照各2孔，取陰性及陽性對照各100μl分別加入反應孔中輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。

蓋上封板膜（可按實際需要自行裁剪），置37℃溫育30分鍾。

小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，後甩去孔內(nei) 液體(ti) ，以上步驟重複4-6次，後在幹淨吸水紙上拍幹。

每孔加酶結合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鍾。

小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌4-6次, 方法同3。切記zui後在幹淨吸水紙上拍幹。

每孔加顯色液100µl，輕微震蕩混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鍾。

每孔加終止液50μl，使反應終止，10分鍾內(nei) 測定結果。

【結果判定】

用酶標儀(yi) 於(yu) 450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。

試驗成立的條件是：

陰性對照（N）OD值<0.20，同時陽性對照（P）OD值>0.3。

計算方法：

（樣品OD值-陰性OD均值）÷（陽性對照OD均值-陰性OD均值）=  IRPC值

陰陽性判斷：

IRPC<0.4判為(wei) 陰性;0.4≤IRPC<0.45判為(wei) 可疑；IRPC≥0.45則判斷為(wei) 陽性。

【有效期】

貯存方法： 2 - 8ºC下貯存有效期為(wei)  12個(ge) 月。