瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒
Midi Purification Kit
產(chan) 品信息：
試劑盒組成 保存 DH101-01 DH101-02
100 次 200 次
溶膠液 DD 室溫 50ml 100ml
25ml 25ml×2
漂洗液 WB 室溫 次使用前按說明加量乙醇
洗脫緩衝(chong) 液 EB 室溫 15ml 15ml
吸附柱 EC 室溫 100 個(ge) 200 個(ge)
收集管（2ml） 室溫 100 個(ge) 200 個(ge)
產(chan) 品介紹：
在高離序鹽存在的情況下，DNA的片斷選擇性的吸附於(yu) 離心柱內(nei) 的矽基質膜上，再通過一係列快速的漂洗－離心的步驟，漂洗
液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質去除，後用低鹽、高 pH 值的洗脫緩衝(chong) 液將純淨 DNA從(cong) 矽基質膜上洗脫。
產(chan) 品特點：
1.離心吸附柱內(nei) 矽基質膜全部采用進口特製吸附膜，柱與(yu) 柱之間吸附量差異極小，可重複性好。克服了國產(chan) 試劑盒膜質量不穩定的弊端。
2.使用了溶膠液，不含傳(chuan) 統溶膠液的碘化納和高氯酸鹽，不抑製回收後酶切、連接克隆等下遊反應。
3.溶膠液調製成為(wei) 了黃顏色，便於(yu) 觀察溶膠效果和監測 pH 值變化從(cong) 而達到理想結合效果，大大提高回收效率。
注意事項:
1.所有的溶液應該是澄清的，如果環境溫度低時溶液可能形成沉澱，此時不應該直接使用，可在 37℃水浴加熱幾分鍾，即可恢複澄清。使用前應該恢複到室溫。
2.儲(chu) 存於(yu) 低溫（4℃或者-20℃）會(hui) 造成溶液沉澱，影響使用效果，因此運輸和儲(chu) 存均在室溫下（15℃-25℃）進行。
3.避免試劑長時間暴露於(yu) 空氣中產(chan) 生揮發、氧化、pH 值變化，各溶液使用後應及時蓋緊蓋子。
4.溶膠液中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要立即用大量清水或者生理鹽水衝(chong) 洗。
5.回收純化的DNA的片段一般在100bp到40kb之間，過長、過短片段的回收效率降低。
6.回收DNA的量和起始DNA的量、洗脫體(ti) 積、DNA的片斷大小有關(guan) 。一般1-20μg， 100bp-5kb的DNA片段，回收率可高達85%-95%。
7.切膠回收時，紫外燈觀察對DNA的片段有損壞作用，應該盡可能使用能量低的長波紫外線，並且盡可能的縮短紫外線下處理的時間。
8.pH值≤7.5時，吸附膜吸附DNA的效率高。如果切下來的凝膠中含有電泳緩衝(chong) 液太多，造成溶膠後溶膠液pH偏高，會(hui) 導致回收率降低。溶膠後，如果溶膠液依舊保持黃色，說明pH正常；如果變成橘紅色或者淡紫色，說明pH偏高，可在膠充分溶解後加5-10μl 3M醋酸鈉（pH5.2）將pH值調到5-7（黃色）。
9.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA， 不影響下遊酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫， 但應該確保pH大於(yu) 7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫，DNA的片段應該保存在-20℃。DNA片段如果需要長期保存，可以用TE緩衝(chong) 液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA， pH 8.0），但是EDTA可能影響下遊酶切反應，使用時可以適當稀釋。
自備試劑：無水乙醇操作步驟：
提示：第yi次使用前請先在漂洗液 WB 中加入量無水乙醇，加入後請及時打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!
1.在長波紫外燈下，用幹淨刀片將所需回收的 DNA 條帶切下，盡量切除不含 DNA 的凝膠，得到凝膠體(ti) 積越小越好。
2.將切下的含有DNA條帶凝膠放入 1.5ml離心管，稱重。
3.加3倍體(ti) 積溶膠液DD。（凝膠重為(wei) 100mg，則加入300μl溶膠液）
如果凝膠濃度大於(yu) 2％，應加入6倍體(ti) 積溶膠液。
4.56℃水浴放置 10min（或直至膠*溶解）。每 2-3min 渦旋震蕩一次加速溶解。
5.可選,：每 100mg初的凝膠重量加入150μl的異丙醇，震蕩混勻。
6.將上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室溫放置 1min，12,000rpm離心30-60sec，倒掉收集管中的廢液。
7.加入500μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm離心 30sec，棄掉廢液。
8.重複操作步驟 7。
9.將吸附柱EC放回空收集管中，12,000rpm 離心 2min，盡量去除漂洗液，以免漂洗液中殘留的乙醇抑製下遊反應。
10 取出吸附柱 EC，放入一個(ge) 幹淨的離心管中，室溫放置數分鍾。
11.在吸附膜的中間部位滴加洗脫緩衝(chong) 液EB（洗脫緩衝(chong) 液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好），室溫放置2min，12,000rpm離心
1min。如果需要較多量DNA，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，離心 1min。(注意：洗脫體(ti) 積不應小於(yu) 30μl，體(ti) 積過少影響回收效率)
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