大鼠微量蛋白(mALB)酶聯免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書(shu)

本試劑盒僅(jin) 供研究使用。

藥品名稱：

通用名：大鼠微量蛋白(mALB)酶聯免疫診斷試劑盒

使用目的：

本試劑盒用於(yu) 測大鼠血清、血漿、或其它相關(guan) 組織液中微量蛋白(mALB)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中大鼠微量蛋白(mALB)水平。用純化的大鼠微量蛋白(mALB)抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被單抗的微孔中依次加入微量蛋白(mALB)，再與(yu) HRP 標記的抗體(ti) 結合，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的微量蛋白(mALB)呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在 450nm 波長下測定吸光度

（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠微量蛋白(mALB)濃度。

試劑盒組成

標本要求

1. 標本采集後盡早進行實驗。
2. 不能檢測含NaN3 的樣品，因 NaN3 抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
3. 可將標本放於-20℃保存，但應避免反複凍融。

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔，在、第二孔中分別加標準品 100μl，然後在、第二孔中加標準品稀釋液 50μl，混勻；然後從孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl， 混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻；混勻後從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混勻後從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻後從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（稀釋後各孔加樣量都為 50μl， 濃度分別為 180μg/L，120μg/L  ，60μg/L，30μg/L，15μg/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然後再加待測樣品 10μl（樣品稀釋度為 5 倍）。加樣時將樣品加於酶標板孔底部，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾。

1. 配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋後備用
2. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒後棄去，如此重複 5 次，拍幹。
3. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
4. 溫育：操作同 3。
5. 洗滌：操作同 5。
6. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鍾.
7. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
8. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液後 15 分鍾以內進行。

計算

以標準物的濃度為(wei) 橫坐標，其 OD 值為(wei) 縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與(yu) OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數， 即為(wei) 樣品的實際濃度。

注意事項

1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控製在 5 分鍾內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線，建議做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值大於標準品孔孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）後再測定，計算時請後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5. 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。
6. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準
7. 底物請避光保存。
8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

檢測範圍：

10μg/L

規格：

96 人份/盒

保存條件及有效期

1. 試劑盒保存：；2-8℃。
2. 有效期：6 個月