EA14A\00                     2016-01版

雞傳(chuan) 染性法氏囊病病毒VP2抗體(ti) 診斷試劑盒（酶聯免疫法）說明書(shu)

【產(chan) 品名稱】

通用名稱：雞傳(chuan) 染性法氏囊病病毒VP2抗體(ti) 診斷試劑盒（酶聯免疫法）

英文名稱：Diagnostic Kit For Antibodies To

Chicken Infectious Bursal Disease Virus VP2（IBDV-VP2 Ab）,ELISA

【規格】

96T×2/盒

【預期用途】

本試劑盒主要目的是測定雞血清中雞傳(chuan) 染性法氏囊病病毒VP2抗體(ti) 的相對水平。可用於(yu) 評估雞群雞傳(chuan) 染性法氏囊病病毒疫苗免疫狀況分析。

【檢驗原理】

本試劑盒應用固相酶聯免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的雞傳(chuan) 染性法氏囊病病毒VP2抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗雞IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為(wei) 包被抗原與(yu) 樣本中的IBDV-VP2-Ab結合，再與(yu) 酶標抗雞IgG抗體(ti) 形成“包被抗原+IBDV-VP2-Ab+酶標抗雞IgG抗體(ti) ”複合物，加入顯色劑，通過酶催化反應顯色。顯色深淺與(yu) IBDV-VP2-Ab的量成正比，當樣本反應顯色後，經酶標儀(yi) 檢測所得結果超過設定的臨(lin) 界值時結果判為(wei) 陽性，即表明免疫產(chan) 生了抗體(ti) 或有自然感染存在。

【主要組成成份】

【自備器材】

1．酶標儀(yi) ，雙波長450/630nm濾光片

2．的微量移液器（單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．洗液吸移裝置

6．一次性槍頭（10ul，200ul）

7．去離子水

【樣本要求】

1．本試劑檢測的樣本為(wei) 雞血清，樣本應無菌采集，2℃～8℃貯存應不超過一周，長期應在-20℃以下保存。

2．避免使用嚴(yan) 重溶血、有沉澱物、含懸浮纖維蛋白及汙染長菌及含疊氮鈉血清樣本。

3．樣本中含有常規用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實驗。

【實驗準備】

1. 試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30min，以獲得理想結果。

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋，稀釋的樣本混合均勻能取得較好結果。

3．配製洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液量取適量體(ti) 積直接用去離子水稀釋20倍，即可使用。

【檢驗方法】

1．加樣：根據樣本數量，取所需板條，檢測時，設陰、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl於(yu) 相應孔中。其餘(yu) 為(wei) 樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）。2．溫育：加樣後，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鍾。

3．洗板：甩去孔內(nei) 液體(ti) ，用洗滌液注滿反應板孔，靜置10s，直接甩出，洗滌3次，後一次洗滌後吸幹板內(nei) 液體(ti) 。

4．加酶：每孔加酶標記物100μl。

5．溫育：加好酶標記物的反應板蓋好蓋板膜，置37℃溫育30分鍾。

6．洗板：同步驟3。

7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，37℃避光反應10分鍾。

8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止後即讀數。

9．讀數：以450/630nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。

【結果判定】

在酶標儀(yi) 上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.15；樣品中抗體(ti) 存在與(yu) 否，或樣本中抗體(ti) 的相對水平的高低由S/P值決(jue) 定，S/P值計算時按以下方式處理:

  S/P=(樣本OD_450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD_450/630值，PCx(—)表示陽性對照孔平均OD_450/630值；

當樣本的S/P≥0.2時判為(wei) 陽性；樣品S/P值＜0.2時判為(wei) 陰性。

【檢驗結果的解釋】

1．嚴(yan) 重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球樣本可能導致假陽性；長菌的樣本可能導致假陰性。

2．因個(ge) 體(ti) 差異或免疫時間長短等因素可能會(hui) 出現個(ge) 別雞隻免疫疫苗後檢測結果為(wei) 陰性。

3．陽性結果用於(yu) 感染雞的血清學診斷以及流行病學調查時需結合其他診斷方法和臨(lin) 床資料進行分析。

【注意事項】

1．本試劑盒僅(jin) 用於(yu) 體(ti) 外診斷。

2．不要使用過期的試劑盒組分，不要把不用批次的組分混合使用。

3．使用試劑盒之前，一定要仔細閱讀說明書(shu) 。

4．本試劑盒應按含有傳(chuan) 染性材料對待，試驗廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鍾，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鍾後廢棄。

5．微孔板從(cong) 冷藏環境中取出時應在室溫中平衡至潮氣幹盡後方可拆開，未用完的微孔板須放回有幹燥劑的鋁箔袋並密封2℃-8℃保存。未用完的液體(ti) 試劑應蓋好瓶蓋，與(yu) 其它配套組份放入試劑盒中於(yu) 2℃-8℃避光保存。

6．若20倍濃縮洗滌液出現結晶，屬正常現象，放置37℃至溶解後即可。

7．應用微量移液器加入樣本及試劑，並經常校對其準確性。

8．加洗滌液時應做到滿而不溢，防止孔口有遊離酶不能洗淨或各孔間的交叉汙染。

9．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水衝(chong) 洗幹淨。

【儲(chu) 存條件及有效期】

於(yu) 2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期12個(ge) 月。

【生產(chan) 日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒。