ELISA檢測e抗原靈敏度更高

E抗原是從(cong) 乙肝表麵抗原（HBsAg）陽性血清中發現的一種新抗原，他可能與(yu) 乙型肝炎的傳(chuan) 染性有密切關(guan) 係。李羽等報道用ELISA檢測e抗原的靈敏度比瓊脂免疫擴散法高150—300倍。試驗程序：

1.病人免疫球蛋白IgG（e抗體(ti) ）的提取：用飽和硫酸銨沉澱法處理上述抗體(ti) 陽性人血清所得粗提液過柱（DEAE-Cellulose）收集IgG陽性部分，再穿流正常人血清柱。得IgG（e抗體(ti) ），濃縮為(wei) 5ng/ml貯藏放於(yu) 冰箱中。

2.酶標記IgG（e抗體(ti) ）的製備：用戊二醛二步法，將10mg  HRP交聯5 mg  IgG（e抗體(ti) ），分裝於(yu) 小瓶，在低溫（-20°C）下保存。

3.ELISA對e抗原的檢測:

a. IgG（e抗體(ti) ）包被聚苯乙烯微量反應板，在4°C過一夜（IgG濃度為(wei) 25r/ml）。

b.洗滌3-5次。

c.加待檢病員血清（1:10稀釋，每份標本加兩(liang) 孔，每孔0.1ml,37°c孵育2h）.

e.洗滌3-5次。

f.加酶標記IgG（e抗體(ti) ），37°C孵育2h（酶標記IgG稀釋度為(wei) 1:640）。

g.洗滌3-5次。

h.加底物與(yu) 供氫體(ti) （H2O2與(yu) OPD）,置於(yu) 暗處反應30min.

i.加2mol/L硫酸終止反應。

j.每板均設陽性與(yu) 陰性對照，根據不同的顯色反應予以判斷。

k.經過上訴方法檢測初步確定為(wei) 陽性的標本，取兩(liang) 份，一份加足量的e抗體(ti) 血清，另一份加正常人血清，在37°C孵育1h，然後再按上述方法測定e抗原。加e抗原體(ti) 血清者，在顯色反應受到控製（與(yu) 正常血清對比）時才可判斷為(wei) e抗原陽性。