土壤酸性轉化酶 (S-AI) 活性檢測試劑盒

可見分光光度法

注意：正式測定之前選擇 2-3 個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

規格：50T/24S

產(chan) 品內(nei) 容：

試劑一：液體(ti)  100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨(lin) 用前加入 25mL 試劑一充分溶解備用；用不完的試劑 4℃保存； 試劑三：液體(ti)  20mL×1 瓶，4℃保存。

標準品：粉劑×1 支，4℃保存，10mg 無水葡萄糖。臨(lin) 用前加入 1mL 試劑一溶解,製備 10mg/mL 葡萄糖標準液備用。

產(chan) 品說明：

S-AI 在 pH 為(wei)  4.5~5.0  (酸性) 條件下催化蔗糖不可逆地分解為(wei) 果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗 糖代謝關(guan) 鍵酶之一。

S-AI 催化蔗糖降解產(chan) 生還原糖，進一步與(yu)  3,5－二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物， 在 540nm 有特征光吸收，在一定範圍內(nei)  540nm 光吸收增加速率與(yu)  AI 活性成正比。

試驗中所需的儀(yi) 器和試劑：

可見分光光度計、台式離心機、水浴鍋、移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水、甲苯。

操作步驟：

一、樣品處理：

新鮮土樣自然風幹或 37℃烘箱風幹，過 30~50  目篩。

二、測定步驟及加樣表：

1 、分光光度計/酶標儀(yi) 預熱 30min ，波長調至 540nm ，蒸餾水調零。

2 、標準液的稀釋：將 10mg/mL 葡萄糖標準液用試劑一稀釋至 4 、3 、2 、1 、0.8 、0.6 mg/mL 的葡萄糖標準溶液備用。

3 、加樣表：

混勻，煮沸 10min 左右 (蓋緊，以防止水分流失) ，流水冷卻後充分混勻，540nm 處蒸餾水調

零，記錄各管吸光值A ，記為(wei)  A 測定管、A 對照管、A 標準管、A 空白管。計算ΔA=A 測定管-A 對照 管，ΔA 標準=A 標準管-A 空白管。

三、S-AI 活性計算：

1 、  標準曲線的繪製：

以葡萄糖濃度為(wei)  x 軸，相應的ΔA 標準為(wei)  y 軸，繪製標準曲線，得到標準方程 y=kx+b；將ΔA 帶 入公式得到 x  ( mg/mL)

2 、  S-AI 活性計算

單位定義(yi) ：37℃每 g 土壤每天產(chan) 生 1mg 還原糖定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活性單位。

S-AI  (U/g) =x×V 酶促÷W÷T

V 酶促：酶促反應總體(ti) 積，0.820mL；W：樣本鮮重，g；T：反應時間：1/24d；

注意事項：

1 、如果加入試劑三，煮沸 10min 後有混濁物出現，建議離心除去沉澱 (10000rpm ，2min ) ，取上 清測定吸光度；

2 、如果吸光值大於(yu)  1 ，可以將上清液再進行稀釋；若吸光值較小，可以減少上清液稀釋倍數。兩(liang) 種 操作均要注意改變公式中的稀釋倍數。

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